蛋氨酸誘導(dǎo)大鼠高同型半胱氨酸血癥模型的實(shí)驗(yàn)研究

摘要：目的  探討采用蛋氨酸不同途徑誘導(dǎo)大鼠高同型半胱氨酸血癥模型的效果。方法  雄性Wister大鼠24只，隨機(jī)分為對(duì)照組、高蛋氨酸飲水組、高蛋氨酸飼料組，每組8只。高蛋氨酸飲水組與高蛋氨酸飼料組分別給予2%蛋氨酸飲水與2%蛋氨酸飼料喂養(yǎng)5周，觀察各組大鼠每日平均進(jìn)食量、每日平均進(jìn)水量和體重增加量的變化；采用Elisa方法分別測(cè)定各組大鼠血清與血漿中的同型半胱氨酸濃度。結(jié)果  蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組血清與血漿中Hcy濃度均高于對(duì)照組（P＜0.05），而蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。每日平均進(jìn)食量為對(duì)照組與蛋氨酸飼料組均高于蛋氨酸飲水組（P＜0.05）；每日平均飲水量蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組均高于對(duì)照組（P＜0.05）。體重增加量為對(duì)照組高于蛋氨酸飼料組（P＜0.05）和蛋氨酸飲水組（P＜0.05）結(jié)論  采用高蛋氨酸飲水和高蛋氨酸飼料誘導(dǎo)大鼠高同型半胱氨酸血癥模型，可得到一致性結(jié)果，相比而言采用飲水中添加蛋氨酸的方法較為簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì)。

關(guān)鍵詞  蛋氨酸；高同型半胱氨酸血癥；模型；大鼠

Experimental Study of Build Homocysteine Model by Methionine in Rats  

Abstract: Objects To explore the effect of homocysteinaemia model. intake methionine In different ways in rats. Methods  24 male Wister rats , randomly divided into control group, high methionine water group, high methionine feed groups, each group of eight. High methionine water group and high methionine feed group were respectively 2% methionine water and 2% methionine feed 5 weeks, to observe the rat average daily food intake, average daily water inflow and the change of weight gain; determination of rat serum and plasma of homocysteine concentration by Elisa method. Results  Methionine water group and methionine feed group of serum and plasma Hcy concentration were higher than those in the control group (P < 0.05), methionine water group and methionine feed group difference was statistically significant (P > 0.05). Average daily food intake control group and methionine feed group is higher than methionine water group (P < 0.05); Average daily water quantity methionine water group and methionine feed group were higher than that in control group (P < 0.05). The change of weight gain control group are higher than the methionine feed group (P < 0.05) and methionine water group (P < 0.05)   Conclusion  Using high methionine water and high methionine feed rats induced homocysteine model, can get consistency results, compared with the method of adding methionine in drinking water is relatively simple and economic.

Keywords:  methionine, Homocysteine, Model, rats

高同型半胱氨酸血癥是近年醫(yī)學(xué)界熱門研究?jī)?nèi)容之一，同型半胱氨酸(Homocysteine, Hcy )是蛋氨酸(Methionine,Met)代謝的中間產(chǎn)物，是腺苷蛋氨酸酶水解反應(yīng)所生成的一種含硫基的氨基酸。越來(lái)越多的研究資料顯示, 高同型半胱氨酸血癥是心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[1]，Hcy因此被稱為能引起血管損傷、動(dòng)脈粥樣硬化和血栓栓塞性疾病的氨基酸[2]。目前通過(guò)蛋氨酸誘導(dǎo)的高同型半胱氨酸血癥動(dòng)物模型主要有3種方式，即通過(guò)蛋氨酸飼料喂養(yǎng)；蛋氨酸溶液灌胃；或蛋氨酸溶于動(dòng)物飲水中建模。為探索更為有效、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便易行的建模方法，我們進(jìn)行了如下研究。

1  材料與方法

1.1  實(shí)驗(yàn)材料

蛋氨酸(methionine, Met)購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)有限公司；同型半胱氨酸試劑盒購(gòu)自BG公司；酶標(biāo)儀為EX800型（產(chǎn)自美國(guó)Biotsx公司）。蛋氨酸飼料制作方法為正常大鼠飼料制備時(shí)添加2%蛋氨酸。

1.2 動(dòng)物模型制備

選用雄性Wister大鼠24只，體重200-250g，購(gòu)自青海省地方病防治研究所。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為3組，對(duì)照組、高蛋氨酸飲水組、高蛋氨酸飼料組，每組8只。高蛋氨酸飲水組給予2%蛋氨酸溶液作為飲用水；高蛋氨酸飼料組每日給予2%蛋氨酸飼料喂養(yǎng)。各組均自由進(jìn)食、飲水，每日測(cè)定進(jìn)食進(jìn)水量。

1.3 血清和血漿中Hcy的測(cè)定

喂養(yǎng)5周后，從大鼠腹主動(dòng)脈采血，各取2ml分別置于含有促凝劑的試管和含有肝素鈉抗凝劑的試管中保存，均置于3000r/min 離心15分鐘，取血清與血漿，采用ELISA法測(cè)定同型半胱氨酸含量，酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)為450nm。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)均以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)的形式表示,使用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)方法為方差分析和配對(duì)t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1各組大鼠每日平均進(jìn)食量與每日平均進(jìn)水量的變化

各組大鼠每日平均進(jìn)食量的比較發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組與蛋氨酸飼料組高于蛋氨酸飲水組（P＜0.05）；而對(duì)各組大鼠每日平均飲水量的比較，蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組均高于對(duì)照組（P＜0.05），同時(shí)，蛋氨酸飼料組高于蛋氨酸飲水組（P＜0.05）。結(jié)果詳見(jiàn)圖1、圖2及表1。

2.2各組大鼠體重增加量的變化

對(duì)照組均高于蛋氨酸飼料組（P＜0.05）和蛋氨酸飲水組（P＜0.05），比較結(jié)果，見(jiàn)表1.

表1  各組大鼠平均每日進(jìn)食量、平均每日進(jìn)水量與體重增加量的變化(X±S)

注：★表示與對(duì)照組比較P＜0.05；◆表示與蛋氨酸飲水組比較P＜0.05。

2.3各組大鼠血清與血漿Hcy濃度變化

結(jié)果顯示，蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組血清與血漿中Hcy濃度均高于對(duì)照組（P＜0.05），而蛋氨酸飲水組與蛋氨酸飼料組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。

表2  各組大鼠血清與血漿Hcy變化(X±S)

注：★表示與對(duì)照組比較P＜0.05；

3 討論

有些研究認(rèn)為蛋氨酸含量超過(guò)3%[3，4]時(shí)會(huì)出現(xiàn)毒性，故本研究使用2%蛋氨酸飼料，造模5周后，血清Hcy濃度達(dá)到19.80±7.24umol/L（大于15 umol/L為高Hcy血癥[5]）；采用蛋氨酸飲水5周后血清Hcy濃度為22.08±5.73 umol/L，兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明兩種方法均可得到一致性結(jié)果。

研究發(fā)現(xiàn),蛋氨酸飲水組和蛋氨酸飼料組大鼠體重增加量均低于對(duì)照組，可見(jiàn)補(bǔ)充蛋氨酸后影響了體重增長(zhǎng)，有研究認(rèn)為是由于蛋氨酸的毒性作用造成的[6]，但從圖1、圖2可看出，蛋氨酸飲水組大鼠進(jìn)食量始終處于較低水平，我們認(rèn)為可能是由于蛋氨酸試劑本身具有的特殊性氣味影響了大鼠的進(jìn)水與進(jìn)食量，從而造成體重增長(zhǎng)變緩。

蛋氨酸飼料組建模過(guò)程中需要采用含有2%的特殊飼料，該飼料不易購(gòu)得，自行制備較為不便，另外該飼料制作過(guò)程中需經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)時(shí)間高壓及烘制，可能會(huì)使蛋氨酸有效成分受到損失，相比較而言采用飲水中添加蛋氨酸的方法較為簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì)。

有文獻(xiàn)報(bào)道高同型半胱氨酸血癥大鼠可采用蛋氨酸灌胃法建模[7,8]，實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，如果按照蛋氨酸劑量1g/kg.d計(jì)算，體重為200g的大鼠每日灌胃量為0.2g，但由于蛋氨酸溶解度僅為3.3g/100ml水，無(wú)法將0.2g蛋氨酸溶于2ml水中，灌胃時(shí)蛋氨酸絮狀沉淀會(huì)在注射器底部被壓縮成片狀，很難灌入胃中，故不建議采用蛋氨酸灌胃法建模。

促凝管血清中Hcy的測(cè)定結(jié)果顯著高于抗凝管血漿中Hcy含量，與有關(guān)報(bào)道[9]一致。這可能與離心前從血液凝固到血清分離需要進(jìn)行一段放置時(shí)間，使血細(xì)胞釋放Hcy入血清有關(guān)。

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