西澳菲斯特農場赤桉樹蜂蜜對血虛證模型小鼠的影響

再生障礙性貧血（Aplastic amemia,，AA），又稱血虛證，為中醫(yī)臨床常見癥候，是一種以造血功能衰竭為特征的疾病，其發(fā)病機制主要與骨髓造血干細胞損傷、造血微環(huán)境損傷以及免疫性造血抑制等機制相關。目前，治療AA的主要藥物，如環(huán)孢素(cyclosporine A，CsA)，存在使用后反應率較低且復發(fā)率較高的缺點。

蜂蜜入藥在我國有著悠久的歷史。蜂蜜用途廣泛、貨源充足、價格適中，對人體無毒副作用，在中藥及中成藥制劑生產中具有獨特的地位。菲斯特農場赤桉樹蜂蜜（Fewster's Farm jarrah honey，FFJH）中含有多種礦物質，且其種類含量與人體血液中的數值十分相近，易于被人體吸收利用。同時其中還含有多種人體細胞、組織和器官所需的營養(yǎng)成分。本研究以西澳菲斯特農場赤桉樹蜂蜜為研究對象，通過建立小鼠血虛模型，探究服用不同劑量的TA10+FFJH以及TA30+FFJH對小鼠血虛癥狀的影響。

一、實驗材料

1.實驗藥品與試劑。西澳菲斯特農場赤桉樹蜂蜜（Fewster's Farm jarrah honey，FFJH），（洋妝源（上海）網絡科技有限公司）；乙酰苯肼、淋巴細胞分離液（美國SIGMA公司）；環(huán)磷酰胺，（上海華聯制藥有限公司）；促紅細胞生成素（EPO）ELASA試劑盒（美國R&D Systems公司）；其他試劑均為國產分析純或生化試劑。

2.實驗動物。選擇BALB/c小鼠80只，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司。雌雄各半，年齡為8周~12周，體重控制在18g~22g。飼養(yǎng)溫度為23℃±1℃，濕度控制在40%~60%，24h光暗循環(huán)，通風良好，飼養(yǎng)期間保證小鼠自由飲水飲食。

二、試驗方法

1.模型建立。模型的建立以及檢測參考文獻中的方法，按照乙酰苯肼、X 射線、環(huán)磷酰胺聯合應用的方法建立再生障礙性貧血小鼠模型，試驗周期為45 d，45d后頸椎脫臼處死小鼠，采樣進行檢測。

實驗分組：選取BALB/c小鼠80只，在適應性喂養(yǎng)1周后，將其分為以下8組：①正常對照組；②血虛模型組；③25%-TA10+FFJH組；④50%-TA10+FFJH組；⑤75%-TA10+FFJH組；⑥25%-TA10+FFJH組；⑦50%-TA10+FFJH組；⑧75%-TA10+FFJH組；每組小鼠10只。

實驗流程：聯合乙酰苯肼、X 射線、環(huán)磷酰胺建立再生障礙性貧血小鼠模型。將不同劑量的蜂蜜溶解至等量生理鹽水中，從第7d開始，以每天一次的頻率按各組劑量對小鼠進行灌胃，同時對空白對照組以及血虛模型組的小鼠灌胃等體積的生理鹽水，實驗周期45d，45d后頸椎脫臼處死小鼠，采樣進行檢測。

2.各組小鼠一般行為學觀察。經上述步驟處理45d后，對小鼠的運動靈活度、反應敏捷度、毛發(fā)光澤度、脫毛情況及體重變化情況進行觀察統(tǒng)計。

3.外周血檢測

（1）細胞計數。各實驗組第45d，對各組小鼠進行稱重，經眼眶取血，測定外周血血紅蛋白含量、紅細胞、白細胞及血小板數；在顯微鏡下觀察外周血涂片，并進行細胞計數。

（2）EPO濃度測定。EPO是一種重要的造血調控因子，血液中的EPO水平能反映機體生成紅細胞的能力。參考文獻中的方法，對血液進行樣品處理，使用試劑盒對血液中的EPO含量進行測定，根據標準曲線計算得出樣本EPO濃度（pg/mL）。

4.骨髓有核細胞（BMCs）計數。實驗參考陳姍姍等的方法，頸椎脫臼處死小鼠, 取右側股骨，用PBS緩沖液反復沖洗，取骨髓細胞懸液，配平至相同體積，取0.2mL細胞懸液裂解紅細胞后，以自動細胞計數儀計數BMCs數量。

5.統(tǒng)計學分析。實驗數據至少重復3次，結果以Means±SEM表示。采用Origin8.5和SPSS分析軟件對實驗數據進行處理分析，統(tǒng)計結果P＜0.05認為有顯著性差異。

三、結果與分析

1.血虛模型小鼠一般行為學觀察。與正常對照組相比，血虛模型組的小鼠陸續(xù)出現皮毛蓬亂、光澤度降低，以及部分脫毛現象，且隨著實驗進程的發(fā)展，癥狀逐漸加重。同時小鼠出現精神不佳、活動減少、體重下降的癥狀。

對比服用各FFJH劑量組與血虛模型組發(fā)現，服用FFJH組小鼠的皮毛光澤度下降及脫毛的程度均有所減輕，同時精神狀態(tài)也有明顯提升。各組小鼠的體重平均值如圖1所示，通過對比可以看出，灌胃FFJH各組小鼠的平均體重均高于血虛模型組，且呈劑量對應關系，說明FFJH對血虛引起的小鼠體重下降有抑制作用。同時，通過在同劑量添加下體重值的對比可以觀察到，TA30+FFJH較TA10+FFJH的效果更佳。

注：與空白組相比，#代表與空白對照組相比差異顯著，P＜0.05；表示與模型組相比差異顯著。

2.FFJH對血虛模型小鼠外周血三系水平影響。表1為不同FFJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組外周血中血紅蛋白（Hb）、紅細胞（RBC）、白細胞（WBC）以及血小板（PLT）水平情況。由表1可以看出，在血虛模型條件下，小鼠血常規(guī)中的各項指標均顯著降低（P＜0.01），即血虛模型組小鼠血象三系水平明顯下降。服用各FFJH劑量組與血虛模型組相比，小鼠外周血三系水平均有所提升，且呈劑量對應關系，實驗結果說明， FFJH對小鼠的再生障礙性貧血有顯著改善效果（P＜0.01）。

表1 FFHJ對小鼠外周血的影響

注：與空白組比較，##代表與空白對照組相比差異極顯著，P＜0.01； *表示與模型組相比差異顯著，P＜0.05，**表示與模型組相比差異極顯著，P＜0.01。

3.FFJH對血虛模型小鼠EPO濃度測定

。研究表明，EPO具有抗凋亡以及促進血管生成的作用，其濃度水平能直觀反映骨髓紅系造血功能障礙的程度，如圖2為不同FFJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組的EPO濃度測定結果。在血虛模型條件下，小鼠血清中的EPO濃度顯著提高（P＜0.01）。而各FFJH劑量組與血虛模型組相比，EPO含量均顯著降低，并呈劑量對應關系(P＜0.01)。實驗結果說明，FFJH對再生障礙性貧血小鼠外周血中各種血細胞的形成有促進作用；且通過組間數據對比發(fā)現，同劑量添加條件下TA30+FFJH組較TA10+FFJH組的EPO濃度下降更明顯，這說明TA30+FFJH較TA10+FFJH，降低EPO濃度的作用更好。

注：與空白組比較，##代表與空白對照組相比差異極顯著，P＜0.01；**表示與模型組相比差異極顯著，P＜0.01。

4.FFJH對小鼠BMCs水平的影響。如圖3為不同FFJH劑量組、空白對照組以及血虛模型組的BMCs水平。與空白組相比，模型組小鼠的造血干細胞數量顯著下降（P＜0.01）。同時各FFJH劑量組的BMCs水平明顯高于血虛模型組，并呈劑量對應關系(P＜0.05)，推測 FFJH有促進造血干細胞增殖的效果，可以抑制再生障礙性貧血小鼠有核細胞減少，進而對骨髓的造血機能產生明顯的促進作用。通過組間數據對比可以發(fā)現，同劑量添加條件下TA30+FFJH組較TA10+FFJH組促進造血干細胞增殖的效果更明顯，這說明TA30+FFJH較TA10+FFJH促進造血干細胞增殖的作用更好。

注：與空白組相比，##代表與空白對照組相比差異極顯著，P＜0.01；**表示與模型組相比差異極顯著，P＜0.01。

四、結論

綜上所述，本實驗建立小鼠血虛模型，觀察各組小鼠體重變化、外周血常規(guī)、EPO濃度以及骨髓單個核細胞數的差異，發(fā)現FFJH可以改善血虛模型小鼠再生障礙性貧血導致的精神不佳、毛發(fā)光澤受損、體重下降的癥狀。服用FFJH后，模型小鼠血象三系水平以及骨髓細胞水平的下降速度明顯減緩(P＜0.01)，且EPO水平波動明顯減小，并呈劑量對應關系(P＜0.01)，說明FFJH能有效緩解并修復血虛模型處理小鼠的骨髓造血微環(huán)境受損。本研究也存在一定的不足之處，實驗雖然證明了FFJH可以為機體補充相關營養(yǎng)素以減輕小鼠的血虛癥狀，但未對調節(jié)血虛癥癥狀的具體機制進行進一步研究。

文章來源：  《中國食品》   http://00559.cn/w/qt/29400.html