牦牛大腸埃希氏菌疫苗保存12個(gè)月抗體效價(jià)測定

大腸桿菌病是引起西藏各種牛生產(chǎn)性能下降的一種傳染病，2005年7月至2007年1月，我們選用在西藏自治區(qū)分離的牦牛大腸桿菌病原株(9903，中國獸藥監(jiān)察所鑒定)，精心研制出符合當(dāng)?shù)靥卣鞯年笈４竽c埃希氏菌病滅活疫苗4批；批號200401、200501、200502、200503；批量3600mL/批，并對保存了3、6、9、12個(gè)月的每批疫苗對家兔進(jìn)行抗體效價(jià)測定，觀察本疫苗保存3、6、9、12個(gè)月后對家兔的免疫效力。
1材料和方法
(1)疫苗：牦牛大腸埃希氏菌病滅活疫苗4批，批號200401、200501、200502、200503。疫苗保存3、6、9、12個(gè)月進(jìn)行抗體效價(jià)測定試驗(yàn)。
(2)試驗(yàn)動(dòng)物：選105－120日齡、體重1.70－2.60kg的兔40只。
(3)陽性血清：大腸埃希氏菌陽性血清。由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所細(xì)菌制品檢測室提供。
(4)抗原：牦牛大腸埃希氏菌甲醛滅活抗原，批號200502；批量300ml/批。
(5)被檢兔血清：4批疫苗在4℃保存3、6、9、12個(gè)月分別接種兔5只，從兔耳靜脈采血分離血清。
(6)陰性血清：每次5只對照兔從耳靜脈采血分離血清。
(7)器材：“V”型96孔微量凝集板、移液器、吸頭、微量振蕩器、0.5％石炭酸生理鹽水等。
(8)具體方法：將4批疫苗4℃保存3、6、9、12個(gè)月分別接種試驗(yàn)兔，每批接種5只。初次接種疫苗0.5mL/只，14d再次接種疫苗1.0mL/只。每次設(shè)5只對照兔，注射肉湯，其劑量和方法與試驗(yàn)兔相同。疫苗接種前和再次接種疫苗后21d分別在試驗(yàn)和對照兔耳靜脈采血，用微量凝集試驗(yàn)檢測抗體效價(jià)，觀察疫苗保存期抗體消長情況。
(9)抗體效價(jià)測定0－51：將試驗(yàn)兔血清分別在“V”型96孔微量凝集板中進(jìn)行。從A排開始加入稀釋液0.5％石炭酸生理鹽水，每孔加入50uL；然后在A排第1孔中加入被檢牦牛血清50uL，混合后，從第1孔吸50uL，加入到第2孔，依次作1：2、1：4、1：8、1：16、1：32……倍比稀釋，然后各孔加入批號200502的甲醛滅活抗原501，LL。血清對照：大腸埃希氏菌陽性和陰性血清同試驗(yàn)兔血清的作法。抗原對照：50uL甲醛滅活抗原+50uL0.5％石炭酸生理鹽水。將試驗(yàn)與對照均置37℃溫箱作用2－4h，放置室溫過夜判定結(jié)果。
(10)具體步驟：4批疫苗→分別保存3、6、9、12個(gè)月→分別接種兔→初次免疫接種疫苗0.5mL→14d再次免疫接種疫苗1.0mL→再次接種后2ld→采血測抗體效價(jià)→觀察疫苗保存期抗體消長情況。
2試驗(yàn)結(jié)果
(1)200401疫苗在4℃保存3、6、9、12個(gè)月分別接種兔5只。并設(shè)對照組5只。通過試驗(yàn)證明200401疫苗抗體效價(jià)在家兔最高為3.311，最低到2.709。通過家兔攻毒保護(hù)試驗(yàn)，抗體效價(jià)為2.709以上的兔攻毒保護(hù)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)200401疫苗在3、6、9個(gè)月抗體效價(jià)最好。隨保存期時(shí)間的延長，出現(xiàn)逐漸遞減的趨勢。
(2)200501疫苗在4℃保存保存3、6、9、12個(gè)月分別接種兔5只，并設(shè)對照組5只，通過試驗(yàn)證明200501疫苗抗體效價(jià)在家兔最高為3.612，最低到2，709。通過家兔攻毒保護(hù)試驗(yàn)，抗體效價(jià)為2.709以上的兔攻毒保護(hù)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)200501疫苗在3個(gè)月時(shí)抗體效價(jià)最好，隨保存時(shí)間的延長，出現(xiàn)逐漸遞減的趨勢。發(fā)現(xiàn)第5組兔的抗體效價(jià)沒有出現(xiàn)遞減的情況。
(3)200502疫苗在4℃保存保存3、6、9、12個(gè)月分別接種兔5只，并設(shè)對照組5只，通過試驗(yàn)證明200502疫苗抗體效價(jià)在家兔最高為3.612。最低到2.709。通過家兔攻毒保護(hù)試驗(yàn)，抗體效價(jià)為2.709以上的兔攻毒保護(hù)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)200502疫苗在3、6個(gè)月抗體效價(jià)最好，隨保存時(shí)間的延長，出現(xiàn)逐漸遞減的趨勢。
(4)200503疫苗在4℃保存3、6、9、12個(gè)月分別接種兔5只，并設(shè)對照組5只，通過試驗(yàn)證明200503疫苗抗體效價(jià)在家兔最高為3.311，最低到2.709。通過家兔攻毒保護(hù)試驗(yàn)，抗體效價(jià)為2.709以上的兔攻毒保護(hù)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)200503疫苗在3、6、9個(gè)月抗體效價(jià)最好。隨保存時(shí)間的延長，出現(xiàn)逐漸遞減的趨勢。發(fā)現(xiàn)第4組家兔的抗體效價(jià)沒有出現(xiàn)遞減的情況。
3分析與討論
(1)牦牛大腸埃希氏菌滅活疫苗主要用來免疫牦牛，來抵抗大腸埃希氏菌病對牦牛的攻擊，我們用4批牦牛大腸埃希氏菌病滅活疫苗。保存3、6、9、12個(gè)月后，分別接種家兔，觀察對家兔的免疫效力，通過試驗(yàn)證明大腸桿菌陽性血清效價(jià)在家兔最高為3.612，最低到2.709。通過家兔攻毒保護(hù)試驗(yàn)，抗體效價(jià)為2.709以上的兔攻毒保護(hù)，表明對試驗(yàn)家兔也有一定的免疫效果。
(2)通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)4批疫苗在3、6個(gè)月抗體效價(jià)最好，隨保存時(shí)間的延長，出現(xiàn)逐漸遞減的趨勢。
(3)不同的家兔由于個(gè)體體質(zhì)及體重的差異，出現(xiàn)抗體效價(jià)的一定差異性。